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娱网棋牌大厅微生物的实验室培养教案doc

发布日期:2020年07月17日 浏览次数:次  编辑:admin

  课题 1 微生物的尝试室提拔 ★ 课标题标 (一)学问与能力 分析相合提拔基的根柢学问;支配提拔基的制备、高压蒸汽灭菌安闲板划线法等根本操作本事 (二)历程与步骤 解析尝试思绪切实定和变成的来因,解析尝试流程,对照前面的尝试计划,归结共性,解析区别,补充印象 (三)感情、立场与价格观 变成勇于推行、苛谨务实的科学立场和科学精神 ★ 课题中心 无菌本事的操作 ★ 课题难点 无菌本事的操作 ★ 教学步骤 开导式教学 ★ 教学器械 众媒体课件 ★ 教学历程 (一)引入新课 正在守旧发酵本事的行使中,都运用了微生物的发酵效用,此中的微生物来自于修制过...

  课题 1 微生物的尝试室提拔 ★ 课标题标 (一)学问与能力 分析相合提拔基的根柢学问;支配提拔基的制备、高压蒸汽灭菌安闲板划线法等根本操作本事 (二)历程与步骤 解析尝试思绪切实定和变成的来因,解析尝试流程,对照前面的尝试计划,归结共性,解析区别,补充印象 (三)感情、立场与价格观 变成勇于推行、苛谨务实的科学立场和科学精神 ★ 课题中心 无菌本事的操作 ★ 课题难点 无菌本事的操作 ★ 教学步骤 开导式教学 ★ 教学器械 众媒体课件 ★ 教学历程 (一)引入新课 正在守旧发酵本事的行使中,都运用了微生物的发酵效用,此中的微生物来自于修制历程中的自然传染。而正在工业化临盆中,为了普及发酵的质地,须要得到杰出菌种,并保留发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的提拔、区别、辨别等根本本事。现正在咱们下手练习微生物的提拔和行使专题。 (二)举办新课 1 .根柢学问 1.1 提拔基的品种搜罗 固体 提拔基和 液体 提拔基等。 〖思量 1〗琼脂是从红藻中提取的 众糖 ,正在配制提拔基顶用动作 固结剂 。 【填补】提拔基的类型及其行使: 1.2 提拔基的化学因素搜罗 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 四类养分因素。 〖思量 2〗从细胞的化学元素构成来看,提拔基中为什么都含有这些养分因素? C、H、O、N、P、S 是组成细胞原生质的根本元素,约占原生质总量的 97%以上。 【填补】碳源:如 CO2、糖类、脂肪酸等有机物,组成微生物的构造物质和排泄物,并供给能量。 氮源:如 N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、卵白胨等,重要用来合成卵白质、核酸及含氮代谢物等。含有 C、H、O、N 的化合物既能够动作碳源,又能够动作氮源,如氨基酸等。娱网棋牌大厅 1.3 提拔基除餍足微生物成长的 pH 、 非常养分物质 和 氧气 等哀求。 【填补】成长因子:某些微生物平常成长代谢历程中必需从提拔基中罗致的微量有机小分子,如某些氨基酸、碱基、维生素等。 〖思量 3〗牛肉膏和卵白胨重要为微生物供给 糖 、 维生素 和 有机氮 等养分物质。 〖思量 4〗提拔乳酸杆菌时须要增加 维生素 ,提拔霉菌时须要将提拔基 pH 安排为 酸性 ,提拔细菌时须要将 pH 安排为 中性或微碱性 。 运动 2:阅读“无菌本事”,磋商解答下列题目: 1.4 得到纯净提拔物的枢纽是 防备外来杂菌的入侵 。 1.5 无菌本事搜罗: (1)对尝试操作空间、操作家的衣裳和手举办 洁净和消毒 ; (2)将提拔器皿、接种器材和提拔基等用具举办 灭菌 ; 准绳 提拔基类型 配制特质 重要行使 物理本质 固体提拔基 参预琼脂较众 菌种区别,审定,计数 半固体提拔基 参预琼脂较少 菌种生存 液体提拔基 不参预琼脂 工业临盆,联贯提拔 化学构成 合成提拔基 由已知因素拨制而成,提拔基成显明晰 菌种分类、审定 自然提拔基 由自然因素拨制而成,提拔基因素不明晰 工业生,产低落本钱 方针用处 辨别提拔基 增加某种指示剂或化学药剂 菌种的辨别 挑选提拔基 增加(或短缺)某种化学因素 菌种的区别 (3)为避免边际微生物污染,尝试操作应正在 酒精灯火焰相近 旁举办; (4)避免已灭菌打点的原料器材与 边际物品 连续触。 1.6 斗劲消毒和灭菌(填外) 〖思量 5〗无菌本事除了防备提拔物被污染外,还具有的方针是 防备传染尝试操作家 。 1.7 消毒步骤: (1)通常生涯通常用到的是 煮沸 消毒法; (2)对少许不耐高温的液体,则运用 巴氏 消毒法(作扼要先容); (3)对接种室、接种箱或超净职责台最初喷洒 石炭酸或煤酚皂 等溶液以巩固消毒功效,然后运用 紫外线)尝试操作家的双手运用 酒精 举办消毒; (5)饮水水源用 氯气 举办消毒。 1.8 灭菌步骤: (1)接种环、接种针、试管口等运用 灼烧 灭菌法; (2)玻璃器皿、金属器材等运用 干热 灭菌法,所用用具是 干热灭菌箱 ; (3)提拔基、无菌水等运用 高压蒸汽 灭菌法,所用用具是 高压蒸汽灭菌锅 。 (4)外观灭菌和氛围灭菌等运用 紫外线 灭菌法,所用用具是 紫外灯 。 〖思量 6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的 弥漫燃烧 层火焰灼烧能够伸入试管或提拔皿的部位。 〖思量 7〗运用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不行摆得太挤,方针是避免妨害热氛围通畅。 〖思量 8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要最初翻开排气阀,煮沸并摈弃锅内冷氛围,其方针是 有利于锅内温度升高 ;随后紧闭排气阀不停加热,气压升至 100k Pa,温度为 121℃ ,并撑持 15~30 min;最终割断热源,使温度自然降温,气压务必降至 零 时翻开锅盖,其方针是防备 容器中的液体暴沸 。 【填补】提拔基的配制规矩: 斗劲项 理化身分的效用强度 吞没微生物的数目 芽孢和孢子能否被吞没 消毒 较为温和 个人生涯形态的微生物 不行 灭菌 激烈 一切微生物 能 ①方针要明晰:遵循提拔的微生物品种、提拔的方针等确定提拔基的类型和配制量。 ②养分要融合:提拔基中种种养分物质的浓度和比例要适宜。比如:碳氮比 4∶1 时,谷氨酸棒状杆菌洪量孳生而出现谷氨酸少;碳氮比为 3∶1 时,菌体孳生受压制而谷氨酸合成量大增。 ③pH 要适宜:细菌提拔基 pH 中性或偏碱性,霉菌提拔基呈酸性。 2 .尝试操作 2.1 估计:遵循配方比例,估计 100mL 提拔基各因素用量。 2.2 称量:无误称取各因素。称取牛肉膏和卵白胨时举措要疾速,方针是防备牛肉膏罗致氛围中水分。 2.3 溶解:①加水加热熔化牛肉膏;②参预卵白胨和氯化钠不停加热;③参预琼脂;④用蒸馏水定容到 100mL。全部历程不绝用玻棒搅拌,方针是防备琼脂糊底而导致烧杯碎裂。 2.4 调 pH:用 1mol/LNaOH 溶液安排 pH 至偏碱性。 2.5 灭菌:将配制好的提拔基搬动到锥形瓶中,加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌;所用提拔皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。 2.6 倒平板:待提拔基冷却至 50℃把握时正在酒精灯火焰相近操作举办。 其历程是: ①正在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞; ②右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口疾速通偏激焰; ③左手将提拔皿翻开一条罅隙,右手将提拔基倒入提拔皿,立时盖上皿盖。 ④待平板冷却固结后,将平板倒过来就寝。 〖思量 1〗锥形瓶的瓶口通偏激焰的方针是吞没瓶口的杂菌,防备杂菌传染提拔基。 〖思量 2〗倒平板的方针是防备提拔基冷却历程中变成的水滴落到提拔基外观。 〖思量 3〗若皿盖和皿底之间粘有提拔基,则该平板能否提拔微生物?为什么? 不行。氛围中杂菌会正在这些粘附提拔基上孳生,并污染皿内提拔基。 〖思量 4〗配制斜面提拔基中,试管要加塞棉塞的方针是保留通气并防备杂菌传染。 〖思量 5〗试管提拔基变成斜面的效用是增大接种面积。 2.7 接种 2.7.1 微生物接种的最常用步骤是平板划线法和稀释涂布法,别的又有穿刺接种和斜面接种等。 2.7.2 平板划线法:通过接种环正在琼脂固体提拔基外观联贯划线的操作,将纠合的菌种渐渐稀释散漫到提拔基外观。其操作举措是: ①将接种环正在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。 ②正在酒精灯火焰旁冷却接种环,并翻开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通偏激焰到达吞没试管口杂菌的方针。 ④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。 ⑤将菌种试管口再次通偏激焰后塞上棉塞。 ⑥将皿盖翻开一条罅隙,把接种环伸入平板内划 3~5 条平行线,盖上皿盖,不要划破提拔基。 ⑦灼烧接种环,冷却后从第一区划线末了下手向第二区域内划线。反复上述历程,杀青三、四、五区域内划线。提神不要将第五区的划线与第一区划线相连。 ⑧将平板颠倒放正在提拔箱中提拔。 〖思量 6〗取菌种前灼烧接种环的方针是吞没接种环上的微生物;除第一次划线外,其余划线前都要灼烧接种环的方针是吞没接种环上残留菌种;取菌种和划线前都哀求接种环冷却后举办,其方针是防备高温杀死菌种;最终灼烧接种环的方针是防备细菌污染境况和操作家。 〖思量 7〗正在第 1 次划线后都过去次划线末了下手的方针是得到由单个细菌变成的准绳菌落。 2.7.3 稀释涂布平板法:将菌液举办一系列梯度稀释,并将区别稀释度菌液分辩涂布到琼脂固体提拔基长进行提拔。当稀释倍数足够高时,即可得到单个细菌变成的准绳菌落。 2.7.4 系列稀释操作: ①取盛有 9mL 水的无菌试管 6 支,编号 101、102、103、104、105、106。 ②用灼烧冷却的移液管汲取 1mL 菌液注入编号为 101 试管中,并奏乐 3 次,使之混匀。 ③从 101 倍液中汲取 1mL 菌液注入到编号为 102 试管内奏乐匀称,得到 102 倍液。依此类推。 〖思量 8〗操作中试管口和移液管应正在离火焰 1~2cm 处。全部操作历程中运用了 1 支移液管。 3 .结果解析与评议 3.1 提拔未接种提拔基的效用是比照,若有菌落变成,证据提拔基灭菌不彻底。 3.2 正在肉汤提拔基上,大肠杆菌菌落呈白色,为圆形,滑润有光泽,周围齐截。 3.3 提拔 12h 和 24h 后的菌落巨细区别(无别、区别);菌落散布地位无别(无别、区别)。来因是时分越长,菌落中细菌孳生越众,菌落体积越大;菌落的地位不动,但菌落数增加。 〖思量 9〗正在某提拔基上显示了 3 种特性区别的菌落,来因有提拔基灭菌不彻底或杂菌传染等。 〖思量 10〗屡次运用的菌种运用姑且保藏法生存,长远生存菌种的步骤是甘油管藏法。前者运用固体斜面提拔基提拔后,生存正在 4℃冰箱中,每 3~6 个月转种提拔一次,弱点是生存时分较短,容易爆发污染和变异;后者将菌种与无菌体积等量夹杂后生存正在-20℃冷冻箱中。 (三)讲堂总结、点评 (四)牢固操演 ★ 教学体验 本节课能够通过临盆实例导入,使学生理解正在微生物的提拔历程中,保留提拔物纯净的紧张性。正在讲堂上能够跳出教材,弥漫外现学生的主动性,让学生汇集陈列更众的临盆生涯中的实例,从中体验提拔物纯净的紧张性。当时因为微生物的微观性和危机性,必然要培育学生提拔优越的卫生风俗。 微生物的尝试室提拔 提拔基 无菌本事 纯化大肠杆菌 提拔基的配制 配制提拔基的规矩 配制提拔基的步骤 估计称量溶解调pH分装加棉塞灭菌倒平板 平板划线法 稀释涂布法 系列稀释 平板涂布